Análise fitoquímica e atividade antifúngica do óleo essencial de folhas de Lippia sidoides Cham. e do Timol contra cepas de Candida spp / Phytochemical analysis and antifungal activity of the essential oil of Lippia sidoides Cham. and of the Thymol against Candida strains

RESUMO A resistência de fungos do gênero Candida aos fármacos químicos tem lançado o desafio de se identificar novas substâncias que possuam atividade antibiótica ou venham a modular o efeito de produtos atualmente usados contra candidíase. O presente estudo avaliou a atividade antifúngica do óleo essencial de Lippia sidoides Cham. e do timol, sobre cepas de Candida. Inicialmente os produtos foram testados frente a 16 cepas fúngicas pela técnica de difusão em meio sólido, o que permitiu selecionar linhagens para continuidade da pesquisa. Com as linhagens de Candida krusei (CK LMBM 01, CK LMBM 02), Candida albicans (CA LM 62) e Candida tropicalis (CT LM 20), procedeu-se, por microdiluição em caldo, a determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e em meio sólido, a Concentração Fungicida Mínima (CFM) dos produtos foi identificada. O microcultivo das leveduras em meio empobrecido foi realizado para verificação de alterações morfológicas e, além disso, uma análise da composição química do óleo foi realizada por Cromatografia Gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG-EM). Nesta análise, o constituinte majoritário foi o timol (84,95%), seguido de compostos como p-cimeno e Éter metil carvacrol, entre outros. A CIM do óleo essencial de Lippia sidoides Cham. frente às cepas variou entre 64 e 256 μg/mL, enquanto a CIM do timol foi estabelecida entre 32 e 64 μg/mL. A CFM do óleo essencial foi determinada entre 128 e 512 μg/mL e para o timol foram encontrados valores entre 64 e 128 μg/mL. Em relação à análise micromorfológica, verificada nas concentrações de CIM e CIM x 2, o óleo essencial inibiu o dimorfismo das cepas CK 01 e CT 20 na CIM e quando foi ensaiado o timol, este, na CIM, impediu a transição morfológica das cepas CK 01 e CA 62. Uma redução da morfogênese também foi obsevada na cepa CT 20, porém apenas em CIM x 2 e de forma mais discreta. Os resultados enaltecem o potencial antifúngico de L. sidoides e de seu composto majoritário timol tanto no combate à Candida quanto na neutralização de um dos fatores de virulência, a capacidade invasiva por formação de hifas e pseudohifas verificado na condição patogênica da candidíase. Estes dados são promissores e poderão incentivar futuras pesquisas sobre os aspectos fitoquímicos, toxicológicos e farmacológicos tanto do óleo essencial de Lippia sidoides como também de seus componentes químicos.

ABSTRACT The resistance of the Candida against drugs has been a challenge to the discovery of new substances with antimicrobial or modulatory effects that could be used against the cadidiasis. This work evaluated the antifungal activity of the essential oil of Lippia sidoides Cham. and of the Thymol against Candida strains. The products were tested towards 16 strains of Candida using the diffusion method, which allowed to select the strains in order to proceed with the research. The strains of Candida krusei (CK LMBM 01, CK LMBM 02), Candida albicans (CA LM 62) and Candida tropicalis (CT LM 20) were assayed by the microdilution method so that the Minimal Inhibitory Concentration (MIC) and the Minimal Fungicide Concentration (MFC) could be determined. The morphogenesis of the Candida was evaluated using poor environment in order to observe morphological changes. The composition of the essential oil was determined by GC-MS. The main compound observed was the thymol (84.95%). The MIC of the essential oil of L. sidoides and Thymol ranged between 64 to 256 μg/mL, and between 32 to 64 μg/mL respectively. The MFC of the essential oil and the thymol varied between 128 to 512 μg/mL and 64 to 128 μg/mL respectively. The morphogenesis of different Candida strains was inhibited in the MIC and MICx2 to the essential oil and thymol. The results indicated the antifungal potential of the L. sidoides and of the Thymol due to the inhibition of the invasive capacity, one of the most important virulence factors for the candidiasis` development. These results are promising to new researches about the phytochemical, toxicological and pharmacological aspects of the essential oil of L. sidoides and its phytochemical compounds.

Short-term preservation of Pecari tajacu ovarian preantral follicles using phosphate buffered saline (PBS) or powdered coconut water (ACP(r)) media / Preservação de folículos ovarianos pré-antrais de Pecari tajacu por curtos períodos utilizando meios à base de solução salina fosfatada tamponada (PBS) ou água de coco em pó (ACP(r))

We compare protocols for the short-term preservation of collared peccarie's ovarian preantral follicles (PFs) by using phosphate buffered saline- (PBS) or powdered coconut water- (ACP(r)) based medium. For morphology analysis each pair of ovaries collected from six females was divided into nine fragments. One fragment was destined for morphology analysis (histology and transmission electron microscopy - TEM), constituting the control group and the other fragments were placed in tubes with PBS or ACP(r), packed in 5 L Styrofoam boxes, stored for 4h, 12h, 24h, and 36h, and then analyzed. For viability analysis a pair of ovaries from two additional females was divided into nine fragments; one fragment was immediately destined for viability analysis (Trypan blue test) and the other fragments were stored as previously described, until 24h and then analyzed. After 4h storage in ACP(r) medium, the follicular integrity was similar to control (87.8% vs 94.4%, respectively); however, ultrastructural analyses revealed swollen mitochondria as the first signals of PF degeneration. It was observed that ACP(r) (66.7%) was more efficient than PBS (49.4%) to preserve the morphological integrity after 36h storage (P<0.05); however, no differences were observed on follicular viability (P>0.05). In conclusion, the use of the ACP(r) is recommended for the short-term preservation of Pecari tajacu preantral follicles...

Compararam-se protocolos para a preservação por curtos períodos de folículos ovarianos pré-antrais (PFs) de catetos, utilizando meios à base de solução salina tamponada (PBS) ou água de coco em pó (ACP(r)). Para a análise morfológica, cada par de ovários coletados de seis fêmeas foi dividido em nove fragmentos. Um fragmento foi destinado para a análise da morfologia (histologia e microscopia eletrônica de transmissão - MET), constituindo o grupo controle, e os demais fragmentos foram colocados em tubos contendo PBS ou ACP(r), acondicionados em caixas térmicas de poliestireno expandido de 5L, armazenados durante quatro, 12, 24 e 36 horas, e, então, analisados. Para a análise da viabilidade, pares de ovários de duas fêmeas adicionais foram divididos em nove fragmentos; um deles foi imediatamente destinado à análise da viabilidade (teste com azul de Trypan), os outros fragmentos foram armazenados como descrito previamente até 24h e, então, foram analisados. Após quatro horas de armazenamento em meio ACP(r), a integridade folicular foi similar ao grupo controle (87,8% vs. 94,4%, respectivamente); contudo, a análise ultraestrutural revelou mitocôndrias edemaciadas como os primeiros sinais de degeneração dos PFs. Foi observado que o ACP(r) (66,7%) foi mais eficiente do que o PBS (49.4%) em preservar a integridade morfológica após 36h (p<0,05); entretanto, nenhuma diferença foi observada para a viabilidade folicular (P>0,05). Em conclusão, o uso da ACP(r) é recomendado para a preservação por curtos períodos de folículos pré-antrais de Pecari tajacu...

DNA repair in Chromobacterium violaceum

Chromobacterium violaceum is a Gram-negative beta-proteobacterium that inhabits a variety of ecosystems in tropical and subtropical regions, including the water and banks of the Negro River in the Brazilian Amazon. This bacterium has been the subject of extensive study over the last three decades, due to its biotechnological properties, including the characteristic violacein pigment, which has antimicrobial and anti-tumoral activities. C. violaceum promotes the solubilization of gold in a mercury-free process, and has been used in the synthesis of homopolyesters suitable for the production of biodegradable polymers. The complete genome sequence of this organism has been completed by the Brazilian National Genome Project Consortium. The aim of our group was to study the DNA repair genes in this organism, due to their importance in the maintenance of genomic integrity. We identified DNA repair genes involved in different pathways in C. violaceum through a similarity search against known sequences deposited in databases. The phylogenetic analyses were done using programs of the PHILYP package. This analysis revealed various metabolic pathways, including photoreactivation, base excision repair, nucleotide excision repair, mismatch repair, recombinational repair, and the SOS system. The similarity between the C. violaceum sequences and those of Neisserie miningitidis and Ralstonia solanacearum was greater than that between the C. violaceum and Escherichia coli sequences. The peculiarities found in the C. violaceum genome were the absence of LexA, some horizontal transfer events and a large number of repair genes involved with alkyl and oxidative DNA damage